小“生”有理（一）|浅谈NK细胞

质量为先 创新为本

NK细胞简介

自然杀伤细胞（Natural killer cell，NK细胞）是先天免疫系统的有效效应物，是抵御包括恶性肿瘤在内的疾病的第一道防线，是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞。NK细胞来源于骨髓造血干细胞，约占血液中所有免疫细胞数量的15%，主要分布于外周血、肝脏和脾脏。在人体内NK细胞主要特征为CD3−CD16+/CD56+淋巴细胞群。

NK细胞大多数具有抗肿瘤细胞毒性。它们可产生大量（如穿孔素、颗粒酶、人体颗粒溶素等）的溶解颗粒，这些分子可诱导应激细胞的细胞死亡。NK细胞也表达多种肿瘤坏死因子（TNF），如FASL和TRAIL，分别与相应的FAS受体或TRAILR结合诱导靶细胞凋亡。此外，NK细胞还产生一系列细胞因子（如IFN-γ、TNFα、IL-10）、生长因子（如GM-CSF）和趋化因子（如CCL3、CCL4、CCL5、XCL1）。

NK细胞可以通过与DC细胞、巨噬细胞和T细胞相互作用来形成免疫反应。细胞表面抑制性和激活受体之间的动态平衡保证了NK细胞效应功能的调节。这些抑制性受体，可识别各种形式的MHC-I分子。因此，靶细胞上MHC-I分子的减少或缺失可降低源于NK细胞的抑制性信号的强度，从而促进NK细胞的激活。激活性受体和天然细胞毒性受体的参与也会导致NK细胞的激活。NK细胞还可介导抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC），是目前热门抗体药物发挥临床效果的重要作用机制。

不同来源的NK细胞

NK细胞可以从PBMC、脐带血（UCB）或骨髓（BM）、hESC（胚胎干细胞）或iPS（诱导多能干细胞）以及细胞系扩增得到。大量高纯度、高活性的NK细胞的扩增是其用于治疗的关键因素。安全高效的生产方法是获得大量功能性NK细胞的关键。

外周血单核细胞来源

NK细胞在PBMC中的含量范围仅为5-15%，现已有多种方案从PBMC中分离并优选扩增原代NK细胞。方案主要是通过免疫磁珠分选的方式（阴选或阳选）富集高纯度NK细胞，以及使用NK激活扩增试剂从PBMC中扩增从而获得高纯度NK。

脐带血或骨随

脐带血或骨髓来源的CD34+造血干细胞是细胞治疗应用的极佳来源。考虑到脐带血来源NK细胞数量较少，早期研究难以达到有效的NK细胞数量，因而开发不同的策略，使用与基质细胞系和促进NK细胞发育的细胞因子组合的共培养系统，从骨髓和脐血来源的CD34+造血干细胞生成NK细胞。

胚胎干细胞或诱导多能干细胞

从hESC或iPS产生NK细胞，实验设计的重点是优化生成这些细胞的培养条件，已经验证了从hESC有效产生功能性NK细胞的CD34+，其具有获得的功能性受体和细胞溶解活性。

永生化NK细胞系

已建立的NK细胞系包括NK-92、YT、NKL、HANK-1、KHYG-1、NK-YS、NKG和NK101等，其中NK-92是FDA唯一批准用于1期和2期临床试验的细胞系。NK-92来源于快速进展的50岁男性非霍奇金淋巴瘤患者的血液，可以很容易地在体外培养，并通过添加重组IL-2，可以在GMP条件下大量扩增，同时可以低温冻存，且复苏后细胞状态和功能良好。

通过扩增来克服 NK 细胞数量有限的问题，以及使用符合 GMP 标准的技术进行筛选和清除的方案能为各种恶性疾病的 NK 细胞免疫疗法提供帮助。要将这些方案应用于临床级NK细胞生产，就必须对 GMP条件进行调整，同时还需要努力开发冻存条件，以建立NK细胞库，极大地提高 NK 细胞在临床中的治疗效果。

合佑生生物提供NK样本&服务&培养基

通过免疫磁珠分选的方式获得纯化的NK细胞

*合佑生生物郑重承诺我司提供的所有细胞服务样本都可溯源，满足药品申报。

Effect cell:PBMC or NK cells

Target cell:SK-BR-3 

Antibody:Herceptin

Detection:LDH

检测原理:乳酸脱酶在胞浆内含量丰富。正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较.可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率。

ADCC优选PBMC

通过对不同Donor的PBMC在相同的体系下进行进行ADCC实验，从而筛选出ADCC效果较好的批次。

更多优选后的PBMC体外筛选数据批次可联系我司商务负责人。

联系人：谢先生 15236077080 

NK细胞体外扩增培养时会遇细胞扩增速率低，扩增时间较长以及在初始培养时发现常规T细胞过度生长从而导致NK细胞的表型衰竭等现象。合佑生NK扩增培养基支持不同来源的NK细胞在无滋养层下快速扩增培养，是细胞治疗临床实验和研究的优选。可广泛用于外周血，脐带血来源，NK 细胞系(NK 92) 及多能干细胞诱导来源的的NK 细胞扩增培养。

NK细胞纯度高

NK扩增能力强

NK杀伤能力强

产品特征

参考文献:

[1]Bader,Peter,Tonn,et al.Selection and expansion of natural killer cells for NK cell-based immunotherapy[J].Cancer Immunology and Immunotherapy: Other Biological Response Modifications, 2016, 65(4):477-484.

上海合佑生生物科技有限公司团队深耕细胞治疗与基因治疗多年，是一家提供该领域产品和服务为主的创新型生物科技公司。公司核心业务为人源免疫细胞采集、应用服务以及配套的生物试剂。公司坚持以人才为基础，质量为先，创新为本的核心价值观，以技术创新为出发点，不断提高临床生物样本采集、制备、应用的质量，引领国产替代的行业新标准，为中国创新药发展和超越提供坚实的基础。